Egy világ egy harc
─ Nemzetközi együttműködés a Covid-19 járvány kihívásaira reagáló közös sors globális közösségének felépítéséhez
A világ minden tájáról elsöprő coronavírus folyamatban lévő globális Covid-19 pandémiás válságot eredményezett. A coronavírus regénynek nincs határa, egyetlen országot sem szabad megkímélni a Covid-19 elleni csatából. Erre a világméretű Covid-19 járványra reagálva, a Liming Bio-Termékek Corp hozzájárulnak globális közösségeink jólétének támogatásához.
Világunk jelenleg a 2019-es koronavírus betegség (COVID-19) pandémiájának példátlan hatásaival szembesül. A mai napig nincs hatékony gyógyszer ennek a betegségnek a kezelésére. Számos diagnosztikai tesztet fejlesztettek ki a COVID-19 kimutatására. Ezek a tesztek molekuláris vagy szerológiai módszereken alapulnak az új koronavírus -specifikus nukleinsav vagy antitest biomarkerek kimutatására. Mivel a COVID-19 elérte a járványi státuszt, az új coronavírus fertőzés korai diagnosztizálása kritikus jelentőségű a vírus terjedésének felmérésében és azt tartalmazza, de az univerzális felhasználás tökéletes tesztje még nem létezik. Tudnunk kell, hogy milyen teszteket lehet használni a COVID-19 fertőzés szűrésére, diagnosztizálására és megfigyelésére, és mi a korlátaik. Nagyon fontos, hogyan lehetne jobban kihasználni ezeket a tudományos eszközöket, és segíteni a gyorsan terjedő és súlyos betegség kialakulásának azonosítását és ellenőrzését.
Az új coronavírus kimutatásának célja annak meghatározása, hogy a COVID-19 fertőzéssel rendelkező személy vagy a vírust csendesen elterjedhet-e a aszimptotikus hordozó, hogy alapvető információkat nyújtson a klinikai kezelés döntéshozatalához. A korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a klinikai döntések 70% -a a tesztelési eredményektől függ. Különböző detektálási módszerek alkalmazásakor a detektálási reagenskészletek követelményei szintén eltérőek.
1. ábra
1. ábra:Az általános biomarkerszintek kulcsfontosságú szakaszait bemutató ábra a COVID-19 fertőzés tipikus időtartamánál. Az x tengely a fertőzés napjának számát, az y tengely pedig a vírusterhelést, az antigének koncentrációját és az antitestek koncentrációját jelzi a különböző időszakokban. Az antitest az IgM és az IgG antitestekre utal. Mind az RT-PCR, mind az antigén detektálását használják az új koronavírus jelenlétének vagy hiányának kimutatására, amely közvetlen bizonyíték a korai betegek kimutatására. A vírusfertőzés egy héten belül a PCR -detektálás vagy az antigén kimutatása előnyös. Az új coronavírus fertőzés után kb. 7 napig az új koronavírus elleni IgM ellenanyag fokozatosan megnőtt a beteg vérében, de a létezés időtartama rövid, és koncentrációja gyorsan csökken. Ezzel szemben a vírus elleni IgG antitest később, általában körülbelül 14 nappal a vírusfertőzés után jelenik meg. Az IgG koncentrációja fokozatosan növekszik, és hosszú ideig tart a vérben. Tehát, ha az IgM -et kimutatják a beteg vérében, ez azt jelenti, hogy a vírus nemrégiben megfertőzött, ami egy korai fertőzés marker. Amikor az IgG antitestet kimutatják a beteg vérében, ez azt jelenti, hogy a vírusfertőzés egy ideje volt. Ezt késői fertőzésnek vagy korábbi fertőzésnek is nevezik. Gyakran megfigyelhető azoknál a betegeknél, akik a helyreállítási szakaszban vannak.
Az új koronavírus biomarkerei
Az új coronavírus egy RNS vírus, amely fehérjékből és nukleinsavakból áll. A vírus bebizonyítja a gazdaszervezet (humán) testét, belép a sejtekbe a megfelelő receptor ACE2 -en keresztül, és replikálódik a gazdasejtekben, így az emberi immunrendszer reagál az idegen betolakodókra és specifikus antitestek előállítására. Ezért az üveg nukleinsavak és antigének, valamint az új koronavírus elleni specifikus antitestek elméletileg felhasználhatók specifikus biomarkerekként az új coronavírus kimutatására. A nukleinsav kimutatására a leggyakrabban alkalmazott RT-PCR technológia, míg a szerológiai módszereket általában az új coronavírus-specifikus antitestek kimutatására használják. Jelenleg különféle vizsgálati módszerek állnak rendelkezésre, amelyeket választhatunk a COVID-19 fertőzés tesztelésére [1].
Az új koronavírus fő vizsgálati módszereinek alapelvei
A COVID_19 -re vonatkozó sok diagnosztikai teszt eddig rendelkezésre áll, és minden nap további tesztkészleteket kaptak a vészhelyzeti felhasználási engedély alapján. Noha az új tesztfejlesztések oly sok különböző névvel és formátummal érkeznek, az összes jelenlegi COVID_19 teszt alapvetően két fő technológiára támaszkodik: a vírusos RNS nukleinsav-kimutatása és a vírus-specifikus antitesteket kimutató szerológiai immunoassay-k (IgM és IgG).
01. Nukleinsav kimutatása
A fordított transzkripciós-polimeráz láncreakció (RT-PCR), a hurok-mediált izotermikus amplifikáció (LAMP) és a következő generációs szekvenálás (NGS) a szokásos nukleinsav módszerek az új koronavírus RNS kimutatására. Az RT-PCR az első típusú teszt a COVID-19-re, amelyet mind az Egészségügyi Világszervezet (WHO), mind az Egyesült Államok Betegség Ellenőrzési és Megelőzési Központja (CDC) ajánl.
02.Serológiai antitest kimutatás
Az antitest egy védőfehérje, amelyet az emberi testben a vírusfertőzésre reagálva állítanak elő. Az IgM az antitest korai típusa, míg az IgG későbbi antitest. A szérum- vagy plazmamintát általában megvizsgálják az antitest specifikus IgM és IgG típusainak jelenlétére a COVID-19 fertőzés akut és gyógyító fázisainak értékelésére. Ezek az antitest-alapú kimutatási módszerek magukban foglalják a kolloid arany immunikromatográfiás vizsgálatot, a latex vagy a fluoreszcens mikrogömb immunokromatográfiát, az enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálatot (ELISA) és a kemilumineszcencia vizsgálatot.
03.Virális antigén detektálása
Az antigén az emberi test által felismert vírus szerkezete, amely az immunvédelmi rendszert kiváltja az antitestek előállításához, hogy megtisztítsák a vírust a vérből és a szövetekből. A víruson jelen lévő vírusos antigén megcélozható és detektálható immunoassay alkalmazásával. A vírusos RNS-hez hasonlóan a vírusos antigének is jelen vannak a fertőzött egyének légzőszervi traktusában, és felhasználhatók a COVID-19 fertőzés akut fázisának diagnosztizálására. Ezért gyakran javasoljuk a felső légúti mintákat, például a nyál, az orrszarvár és az oropharyngealis tamponok, a mély köhögés köpke, a bronchoalveoláris mosási folyadék (BALF) gyűjtését a kezdeti antigén teszteléshez.
Az új koronavírus tesztelési módszereinek kiválasztása
A tesztelési módszer kiválasztása számos tényezőt foglal magában, ideértve a klinikai beállítást, a minőség -ellenőrzés tesztelését, az átfutási időt, a tesztelési költségeket, a mintavételi beszedési módszereket, a laboratóriumi személyzet műszaki követelményeit, a létesítmény és a berendezések követelményeit. A nukleinsavak vagy a vírus antigének kimutatása közvetlen bizonyítékot szolgáltat a vírusok jelenlétére és az új coronavírus fertőzés diagnosztizálására. Noha az antigén detektálására számos módszer létezik, az új coronavírus detektálási érzékenysége elméletileg alacsonyabb, mint az RT-PCR amplifikációja. Az antitestvizsgálat az emberi testben előállított vírusos antitestek kimutatása, amelyek időben elmaradnak, és gyakran nem használhatók korai kimutatásra a vírusfertőzés akut fázisa során. A detektálási alkalmazások klinikai beállítása változhat, és a mintagyűjtési helyek is eltérőek lehetnek. A vírusos nukleinsavak és antigének kimutatásához a mintát a légzőszerkezetben kell összegyűjteni, ahol a vírus van jelen, például nasopharyngealis tamponok, oropharyngealis tamponok, köpet vagy bronchoalveoláris mosásfluid (BALF). Az antitest-alapú kimutatáshoz a vérmintát összegyűjteni kell és meg kell vizsgálni a specifikus anti-vírus antitest (IgM/IgG) jelenlétét. Az antitest és a nukleinsav -teszt eredmények azonban kiegészíthetik egymást. Például, ha a vizsgálati eredmény a nukleinsav-negatív, IgM-negatív, de IgG-pozitív, ezek az eredmények azt jelzik, hogy a beteg jelenleg nem hordozza a vírust, hanem az új coronavírus fertőzésből nyert. [2]
Az új koronavírus tesztek előnyei és hátrányai
Az új coronavírus pneumonia diagnosztizálásának és kezelési protokolljában (Trial 7) (a Nemzeti Egészségügyi Bizottság kiadta a hagyományos kínai orvoslás állami adminisztrációját, 2020. március 3 -án) a nukleinsav -tesztelést használják az új új módszer diagnosztizálására az új új módszer diagnosztizálására. coronavírus fertőzés, míg az antitestvizsgálatot a diagnózis egyik megerősítési módszerének tekintik.
Patogén és szerológiai eredmények
(1) Patogén eredmények: Új coronavírus nukleinsav kimutatható az orrszarvár tamponokban, köpetben, alsó légúti szekréciókban, vérben, ürülékben és más mintákban RT-PCRAND/vagy NGS módszerekkel. Pontosabb, ha a mintákat alsó légúti traktusból (köpet vagy levegő traktus extrahálás) kapják. A mintákat a begyűjtés után a lehető leghamarabb tesztelésre kell benyújtani.
(2) szerológiai eredmények: Az NCP vírus-specifikus IgM kimutathatóvá válik 3-5 nappal a kezdet után; Az IgG az akut fázishoz képest legalább négyszeres növekedés titrálását eléri.
A vizsgálati módszerek kiválasztása azonban a földrajzi helyektől, az orvosi előírásoktól és a klinikai körülményektől függ. Az USA-ban az NIH kiadta a Coronavírus 2019 (COVID-19) kezelési útmutatóit (helyszínen frissítve: április 21-én, 2020), és az FDA a Coronavirus-kór-2019-es diagnosztikai tesztekre vonatkozó politikát adott ki a közegészségügyi vészhelyzet során (kiadották 2010. március 16-án. ), amelyben az IgM/IgG antitestek szerológiai vizsgálata csak szűrővizsgálatként választott ki.
Nukleinsavdetektálási módszer
Az RT_PCR egy nagyon érzékeny nukleinsav -teszt, amelynek célja annak kimutatása, hogy az új coronavírus RNS jelen van -e a légzőkészülékben vagy más mintában. A pozitív PCR-teszt eredménye új coronavírus RNS jelenlétét jelenti a mintában, hogy megerősítsék a COVID-19 fertőzést. A negatív PCR -teszt eredménye nem jelenti a vírusfertőzés hiányát, mivel azt a visszanyert fázisban a rossz minta minősége vagy a betegség időpontja befolyásolhatja. Bár az RT-PCR egy nagyon érzékeny teszt, számos hátránya van. Az RT-PCR-tesztek munkaigényesek és időigényesek lehetnek, alapvetően a minta magas színétől függnek. Ez kihívást jelenthet, mivel a vírus RNS mennyisége nemcsak óriási mértékben változik a különböző betegek között, hanem ugyanabban a betegen belül is változhat, attól függően, hogy a mintát gyűjtik, valamint a fertőzés fázisait vagy a klinikai tünetek kialakulását. Az új koronavírus észlelése magas színvonalú mintákat igényel, amelyek elegendő mennyiségű ép vírusos RNS-t tartalmaznak.
Az RT-PCR-teszt helytelen negatív eredményt (hamis negatív) adhat néhány COVID-19 fertőzésben szenvedő betegnél. Mint tudjuk, az új coronavírus fő fertőzési helyei a tüdőben és az alsó légúti traktusnál találhatók, például alveoli és bronchi. Ezért a mély köhögésből vagy a bronchoalveolaris mosási folyadékból (BALF) a vírus detektálásához a legnagyobb érzékenységnek tekintik a köpetmintát. A klinikai gyakorlatban azonban a mintákat gyakran nasopharyngealis vagy oropharyngealis tamponok felhasználásával gyűjtik a felső légúti traktusból. Ezeknek a mintáknak a gyűjtése nemcsak kényelmetlen a betegek számára, hanem speciálisan képzett személyzetre is szükség van. Annak érdekében, hogy a mintavétel kevésbé invazív vagy könnyebbé váljon, bizonyos esetekben a betegek orális tamponot kaphatnak, és lehetővé teszik számukra, hogy mintát vegyenek a bukális nyálkahártyából vagy a nyelv, amely maguk is megtisztulnak. Elegendő vírusos RNS nélkül az RT-QPCR visszaadhat egy hamis-negatív teszt eredményt. A kínai Hubei tartományban az RT-PCR érzékenységet a kezdeti detektálás során csak körülbelül 30–50%-ra számoltak be, átlagosan 40%-kal. A hamis negatív magas arányt valószínűleg nem volt elegendő mintavétel.
Ezenkívül az RT-PCR-teszthez magasan képzett személyzet szükséges a komplex RNS extrahálási lépések és a PCR amplifikációs eljárás elvégzéséhez. Ezenkívül magasabb szintű biológiai védelmet, speciális laboratóriumi létesítményt és valós idejű PCR-eszközt igényel. Kínában a COVID-19 detektálására szolgáló RT-PCR-tesztet a 2. szintű laboratóriumokban (BSL-2) kell elvégezni, a személyzet védelmével a biológiai biztonsági szint (BSL-3) gyakorlatával. E követelmények szerint január elejétől 2020 február elejétől a Kína Wuhan CDC laboratóriumának kapacitása csak néhány száz esetet tudott kimutatni naponta. Általában ez nem jelent problémát más fertőző betegségek tesztelésekor. Amikor azonban olyan globális járványokkal foglalkozik, mint például a COVID-19, potenciálisan több millió ember tesztelésére, az RT-PCR kritikus kérdéssé válik a speciális laboratóriumi létesítményekre vagy a műszaki berendezésekre vonatkozó követelményei miatt. Ezek a hátrányok korlátozhatják az RT-PCR hatékony eszközként történő felhasználását a szűréshez, és a tesztelési eredmények jelentéseinek késleltetéséhez is vezethetnek.
Szerológiai antitestdetektálási módszer
A betegség folyamatának előrehaladásával, különösen a közép- és késői szakaszokban, az antitest -kimutatási arány nagyon magas. A Wuhan Közép-South Kórházban végzett tanulmány kimutatta, hogy az antitestdetektálási arány több mint 90% -ot érhet el a COVID-19 fertőzés harmadik hetében. Ezenkívül az antitest az új koronavírus elleni emberi immunválasz terméke. Az antitest teszt számos előnyt kínál az RT-PCR-hez képest. Először is, a szerológiai ellenanyagok egyszerű és gyors teszteket tesztelnek. Az antitest oldalirányú áramlási tesztek felhasználhatók a gondozási ponthoz, hogy 15 percet eredményezzenek. Másodszor, a szerológiai teszt által kimutatott cél az antitest, amelyről ismert, hogy sokkal stabilabb, mint a vírus RNS. A gyűjtés, a szállítás, a tárolás és a tesztelés során az antitest-tesztek mintái általában stabilabbak, mint az RT-PCR mintái. Harmadsorban, mivel az antitest egyenletesen eloszlik a vérkeringésben, a nukleinsav -teszthez képest kevesebb a mintavételi variáció. Az antitest teszthez szükséges minta viszonylag kicsi. Például 10 mikroliterrel az ujjprick-vér elegendő az antitest oldalirányú áramlási tesztben történő felhasználáshoz.
Általánosságban elmondható, hogy az antitest tesztet kiegészítő eszközként választják ki a nukleinsav kimutatására, hogy javítsák az új koronavírus detektálási sebességét a betegség kurzusok során. Ha az antitest tesztet nukleinsav-teszttel együtt alkalmazzák, akkor ez növelheti a COVID19 diagnosztizálásának pontosságát azáltal, hogy csökkenti a potenciális hamis pozitív és hamis-negatív eredményeket. Az aktuális üzemeltetési útmutató nem javasolja, hogy két típusú tesztet külön -külön használjon független észlelési formátumként, hanem kombinált formátumként kell használni. [2]
2. ábra:A nukleinsav és az antitest teszt eredményeinek helyes értelmezése az új koronavírus fertőzés kimutatására
3. ábra:Liming Bio-Products Co., Ltd.-Új Coronavírus IgM/IgG Antitest Dual Rapid Test Kit (Strongstep®SARS-COV-2 IgM/IgG antitest gyors teszt, latex immunokromatográfia)
4. ábra:Liming Bio-Products Co., Ltd.-Strongstep®Új koronavírus (SARS-COV-2) multiplex valós idejű PCR-készlet (három gén kimutatása, fluoreszcens szonda módszer).
Jegyzet:Ez a nagyon érzékeny, felhasználásra kész PCR-készlet liofilizált formátumban (fagyasztva-szárítási folyamat) kapható a hosszú távú tároláshoz. A készlet szobahőmérsékleten szállítható és tárolható, és egy évig stabil. Az előkeverék minden csője tartalmazza a PCR amplifikációjához szükséges összes reagentet, beleértve a fordított-transzkriptázt, a Taq polimerázt, a primereket, a szondákat és a DNTPS szubsztrátokat. egy PCR műszerre az amplifikáció futtatásához.
Az új coronavírus kitörésre reagálva a Liming Bio-Termékek Co., Ltd. gyorsan dolgozott két diagnosztikai készlet kidolgozásában, hogy lehetővé tegye a klinikai és közegészségügyi laboratóriumok számára a COVID-19 fertőzés gyors diagnosztizálását. Ezek a készletek nagyon alkalmasak arra, hogy nagyszabású szűréshez használják azokban az országokban és régiókban, ahol az új coronavírus kitörés gyorsan elterjed, és diagnosztizálás és megerősítés biztosítása a COVID-19 fertőzéshez. Ezeket a készleteket csak előre értesített vészhelyzeti felhasználási engedély (PEUA) alapján kell felhasználni. A tesztelés a nemzeti vagy a helyi hatóságok rendeletei alapján tanúsított laboratóriumokra korlátozódik.
Antigéndetektálási módszer
1. A vírus antigén detektálását a közvetlen detektálási kategóriába sorolják, mint a nukleinsav detektálása. Ezek a közvetlen detektálási módszerek a víruskórokozók bizonyítékait keresik a mintában, és felhasználhatók a megerősítés diagnózisához. Az antigéndetektáló készletek kifejlesztése azonban erős affinitással és nagy érzékenységgel rendelkező monoklonális antitestek magas színvonalát igényli, amelyek képesek felismerni és megragadni a patogén vírusokat. Általában több mint hat hónapot vesz igénybe egy monoklonális antitest kiválasztása és optimalizálása, amely alkalmas az antigén detektáló készlet elkészítéséhez.
2. Jelenleg az új koronavírus közvetlen kimutatására szolgáló reagensek továbbra is kutatási és fejlesztési szakaszban vannak. Ezért egyetlen antigén detektáló készletet nem kaptak klinikailag validáltak és kereskedelemben kaphatók. Noha korábban arról számoltak be, hogy a Shenzhenben egy diagnosztikai cég kifejlesztett egy antigénérzékelő készletet és klinikailag tesztelt Spanyolországban, a vizsgálati megbízhatóság és a pontosság nem validálható a reagensminőségi problémák jelenléte miatt. A mai napig az NMPA (volt China FDA) még nem hagyta jóvá az antigén detektáló készletet klinikai felhasználásra. Összegezve, számos detektálási módszert fejlesztettek ki. Minden módszernek megvannak az előnyei és korlátozásai. A különböző módszerek eredményei felhasználhatók az ellenőrzéshez és a kiegészítéshez.
3. A minőségi COVID-19 tesztkészlet előállítása erősen függ a kutatás és fejlesztés optimalizálásától. Liming Bio-Product Co., Ltd. A tesztkészleteknek meg kell felelniük a szigorú gyártási és minőség -ellenőrzési előírásoknak annak biztosítása érdekében, hogy azok biztosítsák a legmagasabb szintű teljesítményt és következetességet. A Liming Bio-Product Co., Ltd. tudósai több mint húsz éves tapasztalattal rendelkeznek az in vitro diagnosztikai készletek tervezésében, tesztelésében és optimalizálásában, hogy az analitikai számszerűsítésben a legmagasabb szintű teljesítményt biztosítsák.
A COVID-19 járvány során a kínai kormány a nemzetközi hotspotokban a járványmegelőzési anyagok óriási igényének növekedésével szembesült. Április 5-én, az Állami Tanács sajtótájékoztatóján, a Közös Tanács közös megelőzési és ellenőrzési mechanizmusának "Az orvosi anyagok minőségirányításának megerősítése és a piac rendjének szabályozása", Jiang Fan, a minisztérium külkereskedelmi osztályának első szintű felügyelője. A kereskedelem azt mondta: "Ezután erőfeszítéseinket két szempontra összpontosítjuk, hogy először felgyorsítsuk a nemzetközi közösség számára szükséges további orvosi ellátás támogatását, valamint a termékek minőség -ellenőrzésének, szabályozásának és kezelésének javításához. Kína hozzájárulni fogunk a globális járványra való közös reagáláshoz és az emberiség közös jövőjével rendelkező közösség felépítéséhez.
5. ábra:A Liming Bio-Products Co., Ltd. új, a Coronavírus reagense megszerezte az EU CE regisztrációs tanúsítványát
A tiszteletbeli igazolás
Houshenshan
6. ábra: A Bio-Termékek Co., Ltd. A Wuhan Vulcan Mountain Kórház Kínában a leghíresebb kórház, amely a súlyos Covid - 19 beteg kezelésére szakosodott.
Ahogy az új Coronavírus kitörése továbbra is terjed az egész világon, a Nanjing Liming Bio-Termékek Co., Ltd. lép fel, hogy támogassa és segítse a közösségeket világszerte innovatív technológiáinkkal a példa nélküli globális fenyegetés elleni küzdelemben. A COVID-19 fertőzés gyors tesztelése kritikus része ennek a fenyegetésnek a kezelésében. Továbbra is jelentős módon járulunk hozzá azáltal, hogy kiváló minőségű diagnosztikai platformokat biztosítunk a frontvonal egészségügyi dolgozók kezébe, hogy az emberek megkaphassák a szükséges kritikus tesztelési eredményeket. A Covid-19 Pandemic elleni küzdelemben a Bio-Termékek Co., Ltd. Liming Bio-Troducts Co., a technológiáink, tapasztalataink és szakértelmünk hozzájárulása a nemzetközi közösségekhez a sors globális közösségének felépítéséhez.
Hosszú nyomja meg a szkennelést és kövessen minket
Email: sales@limingbio.com
Webhely: https://limingbio.com
A postai idő: május-01-2020
