Egy világ egy harc
─Nemzetközi együttműködés egy sorsközösség globális közösségének felépítésére, amely választ ad a COVID-19 világjárvány kihívásaira
Az újszerű koronavírus világszerte elsöprő globális COVID-19 pandémiás válságot eredményezett.Az új koronavírusnak nincsenek határai, egyetlen ország sem lesz megmentve a COVID-19 elleni harctól.A világméretű COVID-19 világjárványra válaszul a Liming Bio-Products Corp hozzájárul globális közösségeink jólétéhez.
Világunk jelenleg a 2019-es új koronavírus-betegség (COVID-19) világjárvány példátlan hatásával néz szembe.A mai napig nem áll rendelkezésre hatékony gyógyszer ennek a betegségnek a kezelésére.A COVID-19 kimutatására azonban számos diagnosztikai tesztet fejlesztettek ki.Ezek a tesztek molekuláris vagy szerológiai módszereken alapulnak az új koronavírus-specifikus nukleinsav vagy antitest biomarkerek kimutatására.Mivel a COVID-19 pandémiás státuszba került, az új koronavírus-fertőzés korai diagnosztizálása kritikus fontosságú a vírus terjedésének felmérésében és megfékezésében, de még nem létezik egyetemes használatra tökéletes teszt.Tudnunk kell, hogy milyen tesztek alkalmazhatók a COVID-19 fertőzés szűrésére, diagnosztizálására és nyomon követésére, és melyek azok korlátai.Nagyon fontos, hogy miként lehet jobban kihasználni ezeket a tudományos eszközöket, és segíteni e gyorsan terjedő és súlyos betegség azonosításában és megjelenésének ellenőrzésében.
Az új koronavírus kimutatásának célja annak megállapítása, hogy a COVID-19 fertőzésben szenvedő egyén vagy tünetmentes hordozó-e, aki esetleg csendben terjeszti a vírust, hogy a klinikai kezeléssel kapcsolatos döntéshozatalhoz elengedhetetlen információkkal szolgáljon.Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a klinikai döntések 70%-a a vizsgálati eredményeken múlik.Különböző kimutatási módszerek alkalmazása esetén a detektáló reagenskészletek követelményei is eltérőek.
1.ábra
1.ábra:Diagram, amely az általános biomarkerszintek kulcsfontosságú szakaszait mutatja a COVID-19 fertőzés tipikus időtartama alatt.Az X tengely a fertőzés napjainak számát, az Y tengely pedig a vírusterhelést, az antigének koncentrációját és az antitestek koncentrációját jelzi a különböző időszakokban.Az antitest az IgM és IgG antitestekre vonatkozik.Az RT-PCR és az antigén-detektálás egyaránt alkalmas az új koronavírus jelenlétének vagy hiányának kimutatására, ami közvetlen bizonyíték a betegek korai felismerésére.A vírusfertőzést követő egy héten belül előnyös a PCR vagy az antigén kimutatás.A mintegy 7 napos új koronavírus-fertőzés után fokozatosan megnőtt a beteg vérében az új koronavírus elleni IgM antitest, de a fennállás időtartama rövid, koncentrációja gyorsan csökken.Ezzel szemben a vírus elleni IgG antitest később, általában körülbelül 14 nappal a vírusfertőzés után jelenik meg.Az IgG koncentrációja fokozatosan növekszik, és hosszú ideig megmarad a vérben.Így, ha az IgM kimutatható a páciens vérében, az azt jelenti, hogy a vírus nemrég fertőződött meg, ami a fertőzés korai markere.Az IgG antitest kimutatása a páciens vérében azt jelenti, hogy a vírusfertőzés már egy ideje fennáll.Ezt késői fertőzésnek vagy korábbi fertőzésnek is nevezik.Gyakran észlelhető olyan betegeknél, akik a gyógyulási szakaszban vannak.
Az új koronavírus biomarkerei
Az új koronavírus egy RNS-vírus, amely fehérjékből és nukleinsavakból áll.A vírus behatol a gazdaszervezet (emberi) testébe, a megfelelő ACE2 receptoron keresztül bejut a sejtekbe, és a gazdasejtekben replikálódik, aminek következtében az emberi immunrendszer reagál az idegen betolakodókra, és specifikus antitesteket termel.Ezért az injekciós üvegben lévő nukleinsavak és antigének, valamint az új koronavírus elleni specifikus antitestek elméletileg specifikus biomarkerként használhatók az új koronavírus kimutatására.A nukleinsav kimutatására a leggyakrabban az RT-PCR technológiát alkalmazzák, míg az új koronavírus-specifikus antitestek kimutatására szerológiai módszereket alkalmaznak.Jelenleg számos vizsgálati módszer áll rendelkezésre a COVID-19 fertőzés tesztelésére [1].
Az új koronavírus fő vizsgálati módszereinek alapelvei
A COVID_19-re vonatkozóan eddig számos diagnosztikai teszt áll rendelkezésre, és minden nap több tesztkészlet kap jóváhagyást vészhelyzeti felhasználási engedély alapján.Bár az új tesztfejlesztések nagyon sokféle névvel és formátummal jelennek meg, a jelenlegi COVID_19 tesztek mindegyike alapvetően két fő technológián alapul: a vírus RNS-ének nukleinsav-detektálásán és a vírusspecifikus antitestek (IgM és IgG) kimutatására szolgáló szerológiai immunoassay-n.
01. Nukleinsav kimutatás
A reverz transzkripciós-polimeráz láncreakció (RT-PCR), a hurok által közvetített izotermikus amplifikáció (LAMP) és a következő generációs szekvenálás (NGS) a leggyakoribb nukleinsav módszerek az új koronavírus RNS kimutatására.Az RT-PCR a COVID-19 vizsgálatának első típusa, amelyet az Egészségügyi Világszervezet (WHO) és az Egyesült Államok Betegségellenőrzési és Megelőzési Központja (CDC) is ajánl.
02. Szerológiai antitest kimutatás
Az antitest egy védőfehérje, amelyet az emberi szervezet a vírusfertőzésre válaszul termel.Az IgM egy korai típusú antitest, míg az IgG egy későbbi típusú antitest.A szérum- vagy plazmamintát általában az ellenanyag specifikus IgM és IgG típusainak jelenlétére vizsgálják a COVID-19 fertőzés akut és lábadozó fázisának értékelése céljából.Ezek az antitest-alapú kimutatási módszerek magukban foglalják a kolloid arany immunkromatográfiás vizsgálatot, a latex vagy fluoreszcens mikrogömb immunkromatográfiát, az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot (ELISA) és a kemilumineszcencia vizsgálatot.
03.Vírusantigén kimutatás
Az antigén egy olyan struktúra a víruson, amelyet az emberi szervezet ismer fel, és az immunvédelmi rendszert antitestek termelésére indítja, amelyek eltávolítják a vírust a vérből és a szövetekből.A víruson jelenlévő vírusantigén immunológiai vizsgálattal megcélozható és kimutatható.A vírus RNS-hez hasonlóan a vírusantigének is jelen vannak a fertőzött egyének légzőrendszerében, és felhasználhatók a COVID-19 fertőzés akut fázisának diagnosztizálására.Ezért gyakran ajánlott felső légúti minták, például nyál, nasopharyngealis és oropharyngealis tampon, mély köhögésből származó köpet, bronchoalveoláris mosófolyadék (BALF) gyűjtése a kezdeti antigénvizsgálathoz.
Az új koronavírus vizsgálati módszereinek kiválasztása
A vizsgálati módszer kiválasztása számos tényezőt foglal magában, beleértve a klinikai környezetet, a vizsgálat minőségének ellenőrzését, az átfutási időt, a vizsgálati költségeket, a mintavételi módszereket, a laboratóriumi személyzettel kapcsolatos műszaki követelményeket, valamint a létesítmény- és felszerelési követelményeket.A nukleinsavak vagy vírusantigének kimutatásának célja, hogy közvetlen bizonyítékot nyújtson a vírusok jelenlétére, és megerősítse az új koronavírus-fertőzés diagnózisát.Bár számos módszer létezik az antigén kimutatására, ezek kimutatási érzékenysége az új koronavírus esetében elméletileg alacsonyabb, mint az RT-PCR amplifikációé.Az antitestvizsgálat az emberi szervezetben termelődő vírusellenes antitestek kimutatása, amely időben késleltetett, és a vírusfertőzés akut szakaszában gyakran nem használható korai felismerésre.A kimutatási alkalmazások klinikai beállításai eltérőek lehetnek, és a mintavételi helyek is eltérőek lehetnek.A vírusos nukleinsavak és antigének kimutatásához a mintát abból a légúti traktusból kell begyűjteni, ahol a vírus jelen van, például nasopharyngeális tampon, oropharyngealis tampon, köpet vagy bronchoalveoláris lavage folyadék (BALF).Az antitest alapú kimutatáshoz vérmintát kell venni, és meg kell vizsgálni a specifikus vírusellenes antitest (IgM/IgG) jelenlétét.Az antitest- és nukleinsav-teszt eredményei azonban kiegészíthetik egymást.Például, ha a vizsgálat eredménye nukleinsav-negatív, IgM-negatív, de IgG-pozitív, ezek az eredmények azt jelzik, hogy a beteg jelenleg nem hordozza a vírust, de már felépült az új koronavírus-fertőzésből.[2]
Az új koronavírus-tesztek előnyei és hátrányai
Az új koronavírus-tüdőgyulladás diagnosztikai és kezelési protokolljában (7. próbaverzió) (az Országos Egészségügyi Bizottság és a Hagyományos Kínai Orvoslás Állami Hivatala által 2020. március 3-án kiadott) a nukleinsav-tesztet használják arany standard módszerként az újdonság diagnosztizálására. koronavírus-fertőzés, miközben az antitest-vizsgálatot is a diagnózis megerősítésének egyik módszerének tekintik.
Patogén és szerológiai leletek
(1) Patogén leletek: RT-PCR és/vagy NGS módszerekkel új koronavírus nukleinsav mutatható ki orrgarat tamponban, köpetben, alsó légúti váladékban, vérben, székletben és egyéb mintákban.Pontosabb, ha a mintákat alsó légutakból veszik (köpet vagy légúti kivonás).A mintákat a begyűjtés után a lehető leghamarabb vizsgálatra kell küldeni.
(2) Szerológiai leletek: NCP-vírus-specifikus IgM kimutathatóvá válik körülbelül 3-5 nappal a megjelenés után;Az IgG legalább 4-szeres titrálást ér el a lábadozás során az akut fázishoz képest.
A vizsgálati módszerek kiválasztása azonban a földrajzi helyektől, az orvosi előírásoktól és a klinikai körülményektől függ.Az Egyesült Államokban az NIH kiadta a Coronavirus Disease 2019 (COVID-19) kezelési iránymutatásait (a webhely frissítése: 2020. április 21.), az FDA pedig a 2019. évi koronavírus-betegség diagnosztikai tesztjére vonatkozó szabályzatot a közegészségügyi vészhelyzet idején (kiadva 2020. március 16-án) ), amelyben az IgM/IgG antitestek szerológiai vizsgálata csak szűrővizsgálatként történt.
Nukleinsav kimutatási módszer
Az RT_PCR egy rendkívül érzékeny nukleinsavteszt, amelynek célja annak kimutatása, hogy az új koronavírus RNS jelen van-e a légúti vagy más mintában.A pozitív PCR-teszt eredménye új koronavírus-RNS jelenlétét jelenti a mintában a COVID-19 fertőzés megerősítésére.A negatív PCR-teszt nem jelenti a vírusfertőzés hiányát, mert azt befolyásolhatja a rossz mintaminőség vagy a betegség időpontja a gyógyulási fázisban stb.Bár az RT-PCR rendkívül érzékeny teszt, számos hátránya van.Az RT-PCR tesztek munka- és időigényesek lehetnek, ami döntően a minta magas minőségétől függ.Ez kihívást jelenthet, mivel a vírus RNS mennyisége nemcsak óriási eltéréseket mutat a különböző betegek között, hanem ugyanazon a páciensen belül is változhat a mintagyűjtés időpontjától, valamint a fertőzési fázistól vagy a klinikai tünetek megjelenésétől függően.Az új koronavírus kimutatásához jó minőségű mintákra van szükség, amelyek elegendő mennyiségű érintetlen vírus RNS-t tartalmaznak.
Az RT-PCR teszt hibás negatív eredményt (fals negatív) adhat néhány COVID-19 fertőzésben szenvedő betegnél.Mint tudjuk, az új koronavírus fő fertőzési helyei a tüdőben és az alsó légutakban, így a léghólyagokban és a hörgőkben találhatók.Ezért a mély köhögésből származó köpet vagy a bronchoalveolaris lavage folyadék (BALF) tekinthető a legmagasabb érzékenységűnek a vírus kimutatására.A klinikai gyakorlatban azonban gyakran a felső légutakból vesznek mintákat orrgarat vagy oropharyngealis tampon segítségével.Ezeknek a mintáknak a gyűjtése nemcsak kényelmetlen a betegek számára, hanem speciálisan képzett személyzetet is igényel.A mintavétel kevésbé invazív vagy könnyebbé tétele érdekében bizonyos esetekben a betegek szájüregi tampont kaphatnak, és lehetővé teszik számukra, hogy maguk vegyenek mintát a szájüreg nyálkahártyájáról vagy a nyelvtörlésről.Elegendő vírus RNS hiányában az RT-qPCR hamis negatív teszteredményt adhat.A kínai Hubei tartományban az RT-PCR érzékenysége a kezdeti észleléskor csak körülbelül 30–50%-os, átlagosan 40%-os.Az álnegatívok magas arányát nagy valószínűséggel az elégtelen mintavétel okozta.
Ezenkívül az RT-PCR teszthez magasan képzett személyzetre van szükség az összetett RNS extrakciós lépések és a PCR amplifikációs eljárás végrehajtásához.Ezenkívül magasabb szintű biológiai biztonságot, speciális laboratóriumi létesítményt és valós idejű PCR-műszert igényel.Kínában a COVID-19 kimutatására szolgáló RT-PCR tesztet 2. szintű biológiai biztonsági laboratóriumokban (BSL-2) kell elvégezni, a személyzet védelmét a 3. szintű biológiai biztonsági (BSL-3) gyakorlat alkalmazásával.E követelmények mellett 2020. január elejétől február elejéig a kínai vuhani CDC-laboratórium kapacitása naponta csak néhány száz esetet volt képes kimutatni.Általában ez nem jelent problémát más fertőző betegségek tesztelésekor.Ha azonban olyan globális világjárványt, mint például a COVID-19, potenciálisan több millió embert kell megvizsgálni, az RT-PCR kritikus kérdéssé válik, mivel speciális laboratóriumi létesítményekre vagy műszaki berendezésekre van szüksége.Ezek a hátrányok korlátozhatják az RT-PCR hatékony szűrési eszközként való alkalmazását, és késedelmet okozhatnak a vizsgálati eredmények jelentésében.
Szerológiai antitest kimutatási módszer
A betegség lefolyásának előrehaladtával, különösen a középső és késői stádiumban, az antitestek kimutatási aránya nagyon magas.A Wuhan Central South Kórházban végzett tanulmány kimutatta, hogy a COVID-19 fertőzés harmadik hetében az antitestek kimutatási aránya elérheti a 90%-ot.Ezenkívül az antitest az új koronavírus elleni emberi immunválasz terméke.Az antitestteszt számos előnnyel rendelkezik az RT-PCR-rel szemben.Először is, a szerológiai antitestek egyszerűen és gyorsan tesztelnek.Az ellenanyag oldalirányú áramlási tesztjei 15 percen belüli eredményt adnak az ellátás helyszínén.Másodszor, a szerológiai teszt által kimutatott célpont az antitest, amelyről ismert, hogy sokkal stabilabb, mint a vírus RNS.A gyűjtés, szállítás, tárolás és tesztelés során az antitest-vizsgálatokhoz használt minták általában stabilabbak, mint az RT-PCR-minták.Harmadszor, mivel az antitest egyenletesen oszlik el a vérkeringésben, kisebb a mintavételi eltérés a nukleinsavteszthez képest.Az antitestvizsgálathoz szükséges mintatérfogat viszonylag kicsi.Például 10 mikroliter ujjszúrt vér elegendő az antitest laterális áramlási teszthez.
Általánosságban elmondható, hogy az antitest-tesztet a nukleinsav-detektálás kiegészítő eszközeként választják, hogy javítsák az új koronavírus kimutatási arányát a betegség lefolyása során.Ha az antitesttesztet nukleinsavteszttel együtt alkalmazzák, az növelheti a COVID19 diagnózisának vizsgálati pontosságát azáltal, hogy csökkenti az esetleges álpozitív és hamis negatív eredményeket.A jelenlegi kezelési útmutató nem javasolja kétféle teszt külön-külön történő használatát független észlelési formátumként, hanem kombinált formátumként kell használni.[2]
2. ábra:A nukleinsav- és antitestvizsgálati eredmények helyes értelmezése az új koronavírus-fertőzés kimutatására
3. ábra:Liming Bio-Products Co., Ltd. – Új koronavírus IgM/IgG antitest kettős gyorsteszt készlet (StrongStep®SARS-CoV-2 IgM/IgG antitest gyorsteszt, Latex immunkromatográfia)
4. ábra:Liming Bio-Products Co., Ltd. – StrongStep®Új koronavírus (SARS-CoV-2) Multiplex Real-Time PCR kit (három gén kimutatása, fluoreszcens próba módszer).
Jegyzet:Ez a rendkívül érzékeny, használatra kész PCR készlet liofilizált formában (fagyasztva szárítás) kapható a hosszú távú tároláshoz.A készlet szobahőmérsékleten szállítható és tárolható, és egy évig stabil.Mindegyik cső premix tartalmazza a PCR-amplifikációhoz szükséges összes reagenst, beleértve a reverz transzkriptázt, a Taq polimerázt, a primereket, a próbákat és a dNTP-szubsztrátokat. A felhasználók egyszerűen felállíthatják a keveréket úgy, hogy a templáttal együtt PCR-minőségű vizet adnak hozzá, majd betöltik. PCR készülékre az amplifikáció futtatásához.
Az új koronavírus-járványra válaszul a Liming Bio-Products Co., Ltd. gyorsan dolgozott két diagnosztikai készlet kifejlesztésén, amelyek lehetővé teszik a klinikai és közegészségügyi laboratóriumok számára a COVID-19 fertőzés gyors diagnosztizálását.Ezek a készletek nagyon alkalmasak nagyszabású szűrésekre olyan országokban és régiókban, ahol az új koronavírus-járvány gyorsan terjed, valamint a COVID-19 fertőzés diagnózisának és megerősítésének biztosítására.Ezek a készletek csak az előzetesen bejelentett sürgősségi felhasználási engedély (PEA) alapján használhatók.A tesztelés a nemzeti vagy helyi hatóságok előírásai szerint tanúsított laboratóriumokra korlátozódik.
Antigén kimutatási módszer
1. A vírusantigén-detektálás a nukleinsav-kimutatással azonos kategóriába tartozik.Ezek a közvetlen kimutatási módszerek a vírusos kórokozók bizonyítékát keresik a mintában, és felhasználhatók a diagnózis megerősítésére.Az antigén-detektáló készletek kifejlesztéséhez azonban jó minőségű, erős affinitással és nagy érzékenységgel rendelkező monoklonális antitestekre van szükség, amelyek képesek felismerni és befogni a patogén vírusokat.Általában több mint hat hónapot vesz igénybe az antigén-detektáló készlet elkészítéséhez alkalmas monoklonális antitest kiválasztása és optimalizálása.
2. Az új koronavírus közvetlen kimutatására szolgáló reagensek jelenleg még kutatás-fejlesztési szakaszban vannak.Ezért nincs klinikailag validált és kereskedelmi forgalomban kapható antigén-detektáló készlet.Bár korábban arról számoltak be, hogy egy sencseni diagnosztikai cég kifejlesztett egy antigén-detektáló készletet, amelyet Spanyolországban klinikailag teszteltek, a reagensminőségi problémák miatt a vizsgálat megbízhatósága és pontossága nem ellenőrizhető.A mai napig az NMPA (a korábbi kínai FDA) még nem hagyott jóvá egyetlen antigén-detektáló készletet sem klinikai használatra.Összefoglalva, számos kimutatási módszert fejlesztettek ki.Mindegyik módszernek megvannak a maga előnyei és korlátai.A különböző módszerek eredményei felhasználhatók ellenőrzésre és kiegészítésre.
3. A minőségi COVID-19 tesztkészlet elkészítése erősen függ a kutatás és fejlesztés során végzett optimalizálástól.Liming Bio-Product Co., Ltd.a tesztkészleteknek meg kell felelniük a szigorú gyártási és minőség-ellenőrzési szabványoknak, hogy biztosítsák a legmagasabb szintű teljesítményt és konzisztenciát.A Liming Bio-Product Co., Ltd. tudósai több mint húsz éves tapasztalattal rendelkeznek az in vitro diagnosztikai készletek tervezésében, tesztelésében és optimalizálásában, hogy biztosítsák a legmagasabb szintű teljesítményt az analitikai mennyiségi meghatározásban.
A COVID-19 világjárvány idején a kínai kormánynak szembe kellett néznie a járványmegelőzési anyagok iránti óriási kereslet megugrásával a nemzetközi hotspotokon.Április 5-én, az Államtanács Közös Megelőzési és Ellenőrzési Mechanizmusának „Az orvosi anyagok minőségirányításának erősítése és a piac rendjének szabályozása” című sajtótájékoztatóján Jiang Fan, a Minisztérium Külkereskedelmi Főosztályának első szintű felügyelője. "Ezután két szempontra összpontosítjuk erőfeszítéseinket, először is, hogy felgyorsítsuk a nemzetközi közösség által igényelt több egészségügyi felszerelés támogatását, valamint javítsuk a termékek minőségellenőrzését, szabályozását és kezelését." Kína hozzájárulását fogjuk adni a globális járványra való közös válaszadáshoz és az emberiség közös jövőjével rendelkező közösség felépítéséhez.
5. ábra:A Liming Bio-Products Co., Ltd. új koronavírus-reagense megkapta az EU CE regisztrációs tanúsítványt
A tiszteletbeli oklevél
Houshenshan
6. ábra: A Liming Bio-Products Co., Ltd. támogatta a Wuhan Vulcan (HouShenShan) Mountain Kórházat a COVID-19 járvány elleni küzdelemben, és megkapta a Wuhan Vöröskereszt tiszteletbeli oklevelét.A Wuhan Vulcan hegyi kórház Kína leghíresebb kórháza, amely súlyos COVID-19 betegek kezelésére specializálódott.
Ahogy az új koronavírus-járvány világszerte tovább terjed, a Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. innovatív technológiáinkkal támogatja és segíti a közösségeket világszerte, hogy leküzdjék ezt a példátlan globális fenyegetést.A COVID-19 fertőzés gyors tesztelése kritikus része e fenyegetés kezelésének.Továbbra is jelentős mértékben hozzájárulunk azáltal, hogy kiváló minőségű diagnosztikai platformokat biztosítunk a frontvonal egészségügyi dolgozóinak kezébe, hogy az emberek megkaphassák a szükséges kritikus vizsgálati eredményeket.A Liming Bio-products Co., Ltd. erőfeszítései a COVID-19 világjárvány elleni küzdelemben az, hogy technológiáinkkal, tapasztalatainkkal és szakértelmünkkel hozzájáruljanak a nemzetközi közösségek számára egy globális sorsközösség felépítéséhez.
Nyomja meg hosszan ~ Keresés és kövessen minket
Email: sales@limingbio.com
Weboldal: https://limingbio.com
Feladás időpontja: 2020. május 01
