Melyik a legjobb módszer?
– Tesztek a SARS-CoV-2 fertőzés diagnosztizálására
A megerősített COVID-19 esetek általános klinikai tünetei közé tartozik a láz, köhögés, izomfájdalom vagy fáradtság.Ezek a tünetek azonban nem egyedi jellemzői a COVID-19-nek, mivel ezek a tünetek hasonlóak más vírussal fertőzött betegségekhez, például az influenzához.Jelenleg a vírusnukleinsav valós idejű PCR (rt-PCR), CT képalkotás és néhány hematológiai paraméter a fertőzés klinikai diagnózisának elsődleges eszköze.A kínai CDC számos laboratóriumi tesztkészletet fejlesztett ki és használt a betegek mintáinak COVID-19-re való tesztelésére.1, USA CDC2és más magáncégek.Az új koronavírus-betegség (COVID-19) diagnosztikai és kezelési irányelveinek Kínában március 3-án kiadott frissített változata diagnosztikai kritériumként bekerült az IgG/IgM antitestteszt, egy szerológiai vizsgálati módszer.1.A vírusnukleinsav rt-PCR teszt továbbra is a jelenlegi standard diagnosztikai módszer a COVID-19 diagnosztizálására.
StrongStep®Új Coronavlrus (SARS-COV-2) Multiplex Real-Time PCR Kit (három gén kimutatása)
Azonban ezek a valós idejű PCR tesztkészletek, amelyek a vírus genetikai anyagát keresik, például orr-, száj- vagy anális tamponokban, számos korláttól szenvednek:
1) Ezek a tesztek hosszú átfutási idővel rendelkeznek, és működésük bonyolult;általában átlagosan 2-3 órát vesz igénybe az eredmény elérése.
2) A PCR-vizsgálatokhoz minősített laboratóriumokra, drága berendezésekre és képzett technikusokra van szükség.
3) Számos téves negatív eredmény található a COVID-19 rt-PCR-re vonatkozóan.Lehetséges, hogy a felső légúti tamponminta alacsony SARS-CoV-2 vírusterhelése miatt (az új koronavírus főként az alsó légutakat, például a tüdő alveolusait fertőzi meg), és a teszt nem tudja azonosítani azokat az embereket, akik fertőzésen estek át, felépültek és kiürítették a vírust a testükből.
Lirong Zou és munkatársai kutatása4azt találta, hogy a tünetek megjelenése után nem sokkal nagyobb vírusterhelést észleltek, nagyobb vírusterhelést észleltek az orrban, mint a torokban, és a SARS-CoV-2-vel fertőzött betegek vírusnukleinsav-ürítési mintája hasonlít az influenzás betegekéhez.4és másnak tűnik, mint a SARS-CoV-2-vel fertőzött betegeknél.
Yang Pan et al5két pekingi betegtől származó sorozatmintákat (torokkenet, köpet, vizelet és széklet) vizsgáltak, és megállapították, hogy a toroktampon és köpetminták vírusterhelése a tünetek megjelenése után körülbelül 5-6 nappal tetőzött, a köpetminták általában magasabb vírusterhelést mutattak, mint toroktampon minták.E két beteg vizeletében vagy székletében nem mutattak ki vírus RNS-t.
A PCR teszt csak akkor ad pozitív eredményt, ha a vírus még jelen van.A tesztek nem tudják azonosítani azokat az embereket, akik fertőzésen estek át, felépültek, és kitisztították a vírust a testükből.A klinikailag diagnosztizált új koronavírus-tüdőgyulladásban szenvedő betegek esetében valójában csak körülbelül 30-50% volt pozitív PCR-re.Sok új koronavírusos tüdőgyulladásban szenvedő beteget nem lehet diagnosztizálni a negatív nukleinsav teszt miatt, így nem kapják meg időben a megfelelő kezelést.Az irányelvek elsőtől a hatodik kiadásáig, kizárólag a nukleinsav-vizsgálati eredmények diagnózisára támaszkodva, ami nagy gondot okozott a klinikusoknak.A legkorábbi „bejelentő”, Dr. Li Wenliang, a Wuhan Central szemésze Kórház, meghalt.Élete során három nukleinsav tesztet végeztek nála láz és köhögés esetén, utoljára PCR pozitív eredményt kapott.
A szakértők megbeszélése után úgy döntöttek, hogy új diagnosztikai kritériumként bővítik a szérumvizsgálati módszereket.Míg az antitest-tesztek, amelyeket szerológiai teszteknek is neveznek, még azután is megerősíthetik, hogy valaki megfertőződött-e, miután az immunrendszere megtisztította a COVID-19-et okozó vírust.
StrongStep® SARS-COV-2 IgG/IgM antitest gyorsteszt
Az IgG/IgM antitest-teszt sokkal populációalapúbb módon segít nyomon követni, hogy ki fertőződött meg, mivel úgy tűnik, hogy sok eset tünetmentes, nehezen azonosítható betegektől terjed.Egy szingapúri házaspárnál a férj PCR-vizsgálattal pozitív lett, a felesége PCR-teszt eredménye negatív volt, de az antitest-vizsgálat eredménye szerint nála is vannak antitestek, ahogy a férjének is.
A szerológiai vizsgálatokat gondosan validálni kell, hogy biztosan megbízhatóan reagáljanak, de csak az új vírus elleni antitestekre.Aggodalomra ad okot, hogy a súlyos akut légúti szindrómát okozó vírusok és a COVID-19 közötti hasonlóság keresztreaktivitáshoz vezethet.A Xue Feng wang által kifejlesztett IgG-IgM6pont-of-care tesztként (POCT) használhatónak ítélték, mivel ujjbegyvérrel az ágy mellett végezhető.A kit érzékenysége 88,66%, specificitása 90,63%.Ennek ellenére továbbra is voltak álpozitív és hamis negatív eredmények.
Az új koronavírus-betegség (COVID-19) diagnosztikai és kezelési útmutatójának kínai frissített változatában1, a megerősített esetek olyan gyanús esetek, amelyek megfelelnek a következő kritériumok bármelyikének:
(1) Légúti minták, vér- vagy székletminták, amelyek SARS-CoV-2 nukleinsavra pozitívnak bizonyultak rt-PCR segítségével;
(2) A légúti, vér- vagy székletmintákból származó vírus genetikai szekvenálása nagymértékben homológ az ismert SARS-CoV-2-vel;
(3) A szérum új koronavírus-specifikus IgM antitest és IgG antitest pozitív volt;
(4) Az új koronavírus-specifikus IgG antitest negatívról pozitívra változott, vagy a koronavírus-specifikus IgG antitest a gyógyulási időszakban négyszerese az akut periódus alattinak.
A COVID-19 diagnózisa és kezelése
| Irányelvek | Megjelent | Megerősített diagnosztikai kritériumok |
| 7-es verzió | 2020. március 3 | ❶ PCR ❷ NGS ❸ IgM+IgG |
| 6-os verzió | 2020. február 18 | ❶ PCR ❷ NGS |
Referencia
1. Útmutató az új koronavírus okozta tüdőgyulladás diagnosztizálásához és kezeléséhez (7. próbaverzió, a Kínai Népköztársaság Nemzeti Egészségügyi Bizottsága, 2020. március 3-án)
http://www.nhc.gov.cn/yzygj/s7652m/202003/a31191442e29474b98bfed5579d5af95.shtml
2. Csak valós idejű RT-PCR protokollt használjon kutatáshoz a 2019-nCoV azonosítására
https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html
3. Szingapúr azt állítja, hogy először alkalmaztak antitesttesztet a koronavírus-fertőzések nyomon követésére
https://www.sciencemag.org/news/2020/02/singapore-claims-first-use-antibody-test-track-coronavirus-infections
4. SARS-CoV-2 vírusterhelés a fertőzött betegek felső légúti mintáiban, 2020. február 19. DOI: 10.1056/NEJMc2001737
5. SARS-CoV-2 vírusterhelése klinikai mintákban Lancet Infect Dis 2020 Megjelent online: 2020. február 24. (https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30113-4)
6. A SARS-CoV-2 gyors IgM-IgG kombinált antitestteszt kifejlesztése és klinikai alkalmazása
Fertőzés diagnosztika XueFeng Wang ORCID azonosító: 0000-0001-8854-275X
Feladás időpontja: 2020.03.17
